高效液相色譜儀操作步驟：

1).過(guò)濾流動(dòng)相，根據需要選擇不同的濾膜。

2).對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3).打開(kāi)HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀)，連接好流動(dòng)相管道，連接檢測系統。

4).進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

5).有一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10ml/min。

6).調節流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線(xiàn)，觀(guān)察基線(xiàn)的情況。

7).設計走樣方法。點(diǎn)擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩流，一般2-5分鐘;b.基線(xiàn)歸零;c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉換;d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。

8).進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線(xiàn)，洗掉剩余物。

9).關(guān)機時(shí)，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。

10).填寫(xiě)登記本，由負責人簽字。

注意事項：

1).流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。

2).柱子是非常脆弱的，**次做的方法，先不要讓液體過(guò)柱子。

3).所有過(guò)柱子的液體均需嚴格的過(guò)濾。

4).壓力不能太大，**不要超過(guò)2000psi。